Ergebnisse können nach 16 Stunden Inkubation bei 37°C erzielt werden. Eine Verkürzung der Inkubationszeit um eine Stunde (15 h) ist ebenfalls in Ordnung, aber kürzere Inkubationszeiten verringern die Empfindlichkeit des N-Light™ E. coli-Tests für gestresste Zellen. Falls eine relativ hohe Anzahl von E. coli erwartet wird, kann die Inkubationszeit auf 8 Stunden verkürzt werden. Eine bis zu sechs Stunden längere Inkubationszeit (30 Stunden) hat ebenfalls keinen Einfluss auf den Test, aber längere Inkubationszeiten wurden noch nicht validiert und können zu unzuverlässigen Ergebnissen führen