AquaSpark™ Substrate sind Dioxetanverbindungen mit Molekularstrukturen, die von den Zielenzymen spezifisch erkannt werden. Wenn sie von einem Enzym gespalten werden, emittieren die AquaSpark™ Substrate Licht durch einen Prozess, der Chemilumineszenz genannt wird. Der N-Light™ E. coli-Test verwendet ein AquaSpark™ Substrat für das Enzym Beta-Glucuronisdase, das hochspezifisch für Eschrichia coli-Stämme.