Die Bebrütung bei höheren oder niedrigeren Temperaturen als 37 °C beeinträchtigt die Leistung des Tests erheblich und erhöht das Risiko falsch negativer Ergebnisse. Höhere Temperaturen könnten sich negativ auf die Überlebensrate und die Wachstumseigenschaften von Listeria monocytogenes auswirken; niedrigere Temperaturen verlangsamen die Wachstumsrate. Darüber hinaus wurde nachgewiesen, dass Listeria monocytogenes den Triggerfaktor (PI-PLC) bei 37°C optimal exprimieren kann und bei Temperaturen unter 37°C deutlich reduziert wird. NEMIS kann nur dann eine zuverlässige Testleistung garantieren, wenn die Inkubation bei einer konstanten Temperatur von 37°C erfolgt.